1.什么是細胞全能性？

    細胞全能性（cell totipotency）比較權威的定義是1984年國際組織培養協(xié)會(huì )做出的："細胞全能性為細胞的某種特征，有這種能力的細胞保留形成有機體所有細胞類(lèi)型的能力"。這個(gè)定義比一般所說(shuō)的概念"一個(gè)細胞中包含著(zhù)這種生物的全部遺傳信息（基因），在適當的條件下可以發(fā)育成一個(gè)完整的生物體"更基本和全面。它不但包含了培養細胞再生成植株的情況（分化成各種類(lèi)型的細胞，并以一定形式構建成植物），同時(shí)也包含了培養細胞生產(chǎn)次生代謝物的情況（不分化或只分化成某種類(lèi)型細胞，但仍留著(zhù)分化為其他細胞類(lèi)型的能力）。前者成為組織培養和轉基因植物需要進(jìn)行植株再生的理論基礎，后者成為像微生物發(fā)酵一樣培養細胞，生產(chǎn)人們所需要的次生代謝產(chǎn)物的理論基礎，如通過(guò)紅豆杉的細胞培養生產(chǎn)紫杉醇。

2.植物組織培養技術(shù)是如何發(fā)展起來(lái)的？

    技術(shù)和理論是一對孿生兄弟，相輔相成，技術(shù)手段的發(fā)明會(huì )促進(jìn)理論的創(chuàng )新，理論的創(chuàng )新又會(huì )指導技術(shù)的實(shí)踐活動(dòng)。植物組織培養也是如此。 早在1902年，哈伯蘭特（Haberlandt）提出高等植物的器官和組織可以不斷地分割，直至單個(gè)細胞的觀(guān)點(diǎn)，預言植物體細胞在適宜的條件下，有發(fā)育成完整植株的潛力，提出了植物細胞全能性的設想，并且用植物細胞組織進(jìn)行了培養實(shí)驗。他雖然未能獲得再生植株，卻是植物組織培養的開(kāi)創(chuàng )者。1902年他發(fā)表了著(zhù)名論文《植物細胞離體培養實(shí)驗》，論文中提出的植物細胞全能性的理論是植物組織培養的理論基礎。 從哈伯蘭特提出植物細胞全能性的理論，到1958年斯圖爾德（F.C.Steward）等人第一次用胡蘿卜根的韌皮部細胞證實(shí)了植物細胞的全能性，用了整整56年。56年中許多科學(xué)家做的事情歸納起來(lái)都是在探索哈伯蘭特提出的"植物細胞在適宜條件下，有發(fā)育成完整植株的潛力"中的適宜條件。 20世紀60年代以后，植物組織培養進(jìn)入了迅速發(fā)展階段，并逐步走向生產(chǎn)應用，如快繁脫毒、單倍體育種、種質(zhì)資源保存、生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物等，也為人工種子、細胞融合、轉基因植物等奠定了基礎。

3.怎樣制備胡蘿卜培養基（供參考）？

（1）誘導胡蘿卜愈傷組織 在MS培養基［注］中加入質(zhì)量分數為0.5 mg/L的6-BA和質(zhì)量分數為0.5 mg/L的NAA

（2）誘導胡蘿卜叢芽 在MS培養基中加入質(zhì)量分數為2 mg/L的KT和質(zhì)量分數為0.2 mg/L的NAA

（3）誘導胡蘿卜生根 在1/2MS培養基中加入質(zhì)量分數為0.1 mg/L的NAA ［注］：MS培養基的配制方法見(jiàn)《選修1附錄3中八》。

4.植物組織培養中的愈傷組織是如何形成及再分化的？

      植物組織培養中使用的外植體一般是高度分化了的細胞，在植物體中是不會(huì )再分裂繁殖的，只是執行某種功能直至死亡。這些細胞在培養基上培養時(shí)會(huì )由原來(lái)的分化狀態(tài)，變成分生狀態(tài)的細胞，分裂產(chǎn)生愈傷組織，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為脫分化（dedifferentiation）過(guò)程。這種轉變在細胞的形態(tài)結構和生理生化上都會(huì )產(chǎn)生一系列變化。組織培養的研究結果表明分化細胞的脫分化需要兩個(gè)條件，即創(chuàng )傷和外源激素。 目前人們對于脫分化過(guò)程的本質(zhì)還不清楚。分化細胞在細胞周期中是處于一種相對靜止狀態(tài)的細胞（G0期細胞），脫分化是要打破這種狀態(tài)，使細胞進(jìn)入細胞周期中的G1期，并沿著(zhù)G1期→S期→G2期→M期的循環(huán)進(jìn)行細胞分裂，形成愈傷組織�，F在發(fā)現細胞周期受基因調控，一種稱(chēng)為編碼細胞周期依賴(lài)性激酶CDK（cycilin dependent kinase）的基因和一種細胞周期蛋白（cyclin）可能與植物細胞脫分化的第一次分裂啟動(dòng)有關(guān)。那么，什么因素誘導細胞周期調控基因的作用，培養實(shí)踐證明與外源激素有關(guān)。至于激素如何誘導以及誘導作用的過(guò)程目前仍不清楚，有待深入研究。分化細胞脫分化后細胞結構有兩點(diǎn)明顯的變化：一是在細胞內出現液泡蛋白；二是葉綠體轉變成原質(zhì)體。 當細胞脫分化形成愈傷細胞后，經(jīng)過(guò)一段時(shí)期的分裂，細胞群體變成不是一種細胞類(lèi)型的均一群，又會(huì )產(chǎn)生分化，形成分生細胞或分生細胞團，由此再生成植株有兩條途徑：一是形成體細胞胚（功能類(lèi)似于受精過(guò)程產(chǎn)生的胚），通過(guò)體細胞胚形成再生植株。二是走器官發(fā)生的途徑再生植株，分生細胞在一定的誘導條件下重建芽的分生組織，分化出芽后再生根，成為完整的植株。

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